层析岗位操作规程介绍

1 目的:建立层析上样岗位操作规程,规范岗位操作。 2 范围:适用于层析上样岗位。 3 职责:层析上样操作人员。 4 内容: 4.1 准备工作 
4.1.1 检查层析柱、中转桶、脱盐罐、超滤器是否处于备用或已安装。 4.1.2 检查设备是否已清洁。 4.2 溶液的配置 
4.2.1 平衡液:称取12000-12100g Tris,溶于5000L低温纯化水中,开搅拌,当缓冲液温度≤8℃时,再用盐酸调PH**9.05-9.35。 
4.2.2 洗脱液:称取50000-50100g氯化钠,溶于5000L已配置好的平衡缓冲液中,开启搅拌,将溶液温度控制在0-4℃左右。 
4.2.3 上样液:脱盐罐内体积、电导合格后,打开平衡液进料阀将体积补加到500±20升,再用5M 氢氧化钠调PH**9.05-9.35,取样检测物料的蛋白含量及其活性。配制好的上样液电导值应不高于1100μs/cm,保持上样液的温度在0-8℃。 4.3 上样 
4.3.1 打开层析柱平衡液进液阀,层析柱出液阀,打开平衡液中转泵电源开关,平衡液冲洗柱床约3个体积,流速2.5-3.0L/min流出液检测、PH值9.05-9.35, 
4.3.2 平衡结束后,关闭层析柱平衡液进料阀,平衡液中转泵,打开层析柱上样液进料阀,上样液中转泵电源开关,开始上样,流速2.5-3.0L/min。上样液经层析柱分离,流出液每160-200升检测蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性。上样过程中及时调穿柱峰的pH值为2.0-3.0。 
4.3.3 上样全部泵入层析柱后,关闭上样液进料阀,关闭上样液中转泵电源开关,打开层析柱平衡液进液阀,打开平衡液中转泵电源开关,继续用平衡液冲洗柱床,流速2.5-3.0L/min, 收集流出液, 检测流出液蛋白含量小于1mg/ml时停止收集,按实际流速计算时间冲洗250升平衡液。 
4.3.4 洗柱结束后, 关闭层析柱平衡液进料阀,平衡液中转泵,打开层析柱洗脱液进液阀,打开洗脱液中转泵开关,用洗脱液冲洗柱床,流速2.5-3.0L/min,收集洗脱流出液同时取样检测蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性洗脱液蛋白低于1mg/ml时停止洗脱和洗脱液收集,洗脱过程中及时调洗脱峰的pH值为2.0-3.0。 4.4 浓缩脱盐 
4.4.1 收集的穿柱峰,使用蠕动泵中转到浓缩罐内,打开浓缩罐罐底阀门;打开超滤器进液阀门;打开超滤器回流阀门和废液阀门,开启超滤器进料泵电源开关,通过控制超滤器回流阀门开关将压力控制在0.05-0.1Mpa之间,检测废液排除蛋白含量在5mg/ml以下,否则检测超滤器心是否泄漏。废液通过管道排放到下水道。 
4.4.2 当浓缩罐内浓缩液蛋白含量达到50-60mg/ml浓缩完成,将回流阀门回流到中专桶内,为胰蛋白酶冻干液。 
4.4.3 收集的洗脱峰,使用蠕动泵中转到浓缩罐内,打开浓缩罐罐底阀门;打开超滤器进液阀门;打开超滤器回流阀门和废液阀门,开启超滤器进料泵电源开关,通过控制超滤器回流阀门开关将压力控制在0.05-0.1Mpa之间,检测废液排除蛋白含量在5mg/ml以下,否则检测超滤器心是否泄漏。废液通过管道排放到下水道。当脱盐罐内体积在80-120升时检测电导率,打开脱盐罐脱盐液进料阀门,加入脱盐液180-220升。4.4.4 重复上一步,当电导率低于1200us/cm时,控制体积在80-120升完成,将回流阀门回流到中专桶内,为糜蛋白酶冻干液。 4.4.5 将胰冻干液于糜冻干液与冻干进料人员交接。

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