封闭式核酸层析试纸检测试剂盒及检测方法浅谈

1.一种常温保存核酸扩增试剂的方法,其特征在于,将核酸扩增试剂中的部分试剂或全部试剂,通 过固化工艺转变为固态,从而实现核酸扩增试剂能在常温下稳定保存,进而实现核酸检测试剂盒在常温下 稳定保存。 
  2.如权利要求1所述方法,其特征在于,所述的常温是指在9~45℃的温度范围内,所述的稳定保存 是指**少保存3个月后,各试剂的生物、物理和化学等性能变异系数CV小于10%。 
  3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述核酸扩增试剂包括如下组分: 
  组分A:核酸扩增试剂中能在常温液态和固态下稳定保存的组分,包括:水、Tris-HCl,MgSO4,甜 菜碱,(NH4)2SO4,NaCl,MgCl2,曲拉通; 
  组分B:核酸扩增试剂中在常温液态下不一定稳定而在常温固态下能稳定保存的组分,包括:脱氧核 苷三磷酸,引物、探针或其他核苷酸序列以及带小分子标记的引物、探针或其他核苷酸序列; 
  组分C:核酸扩增试剂中在常温液态下不稳定而在固态下稳定的组分,包括:Taq DNA聚合酶、Tth DNA 聚合酶、Vent DNA聚合酶、Pwo DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶、T7RNA聚合酶、 AMV逆转录酶、MMLV逆转录酶。 
  4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,实现核酸扩增试剂的常温下稳定保存,**少需要固化 所述组分C,将所述组分A和所述组分B以液态形式稳定储存;或者,同时将组分B和组分C固化,将 组分A以液态形式保存;或者,同时将组分A、组分B和组分C全部固化,整个核酸扩增试剂以固体形 式在常温稳定保存。 
  5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述固化工艺是指液态的核酸扩增试剂组分在固化保护 剂的存在下,通过物理干燥脱水的工艺变成固体;所述物理干燥脱水的工艺,包括:真空抽干工艺、冷冻 真空干燥工艺和烘干工艺。 
  6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述固化保护剂,包括糖、蛋白、表面活性剂、抗氧化 剂和防腐剂;所述糖,包括双糖和多糖,其使用的终浓度为体积比的0.5~20%;所述蛋白,包括动物血清 与动、植物蛋白,其使用的终浓度为体积比的0.1~15%;所述的表面活性剂包括离子和非离子的表面活性 剂,其使用的终浓度为体积比的0.01~5%;所述的抗氧化剂,包括维生素、超氧化物歧化酶,其使用的终 浓度为体积比的0.01~5%;所述的防腐剂,包括叠氮钠、硫柳汞、Proclin300,其使用的终浓度为体积比 的0.001~0.1%。   7.一种常温保存的封闭式核酸层析试纸检测试剂盒,其特征在于:包括样本的核酸提取试剂、能在 常温下保存的核酸扩增试剂和封闭式层析试纸检测装置;所述封闭式核酸层析试纸检测试剂盒是指在封闭 式层析试纸检测装置中对常温保存的核酸扩增试剂的扩增产物溶液通过免疫层析试纸实现快速检测; 
所述核酸扩增试剂采用权利要求1-6任一项所述的方法进行常温保存; 
所述封闭式层析试纸检测装置,包括:免疫层析试纸和封闭式检测装置;其中免疫层析试纸被固定在 封闭式检测装置中,被检测样品溶液不能同装置外部环境接触。 
  8.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述核酸扩增试剂的检测目标对象包括:RNA和DNA; 所述核酸扩增试剂用于从DNA或RNA模板启动核酸序列的扩增,**终产生远高于模板起始浓度的且与模 板互补或相同序列的RNA或DNA片段产物,核酸扩增反应方法包括:聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链 式反应、链替代扩增、连接酶链式反应、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、转录介导扩增、实时荧光定量 环介导恒温扩增。 
  9.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于:所述的封闭式层析试纸检测装置由溶液管,连接管和 试纸管装配组成: 
  1)溶液管:用于储存核酸扩增试剂和采用核酸提取试剂提取的DNA或RNA进行扩增反应;该溶液 管包括溶液管体和溶液管盖子;所述溶液管管体内壁圆周面上设有上下两个凹槽,分别是溶液管内部** 凹槽、溶液管内部第二凹槽;所述溶液管盖子的外周设有凸起密封环,该溶液管盖子外周凸起密封环与溶 液管内部**凹槽、溶液管内部第二凹槽都能配合密封,溶液管内部**凹槽能允许溶液管盖子重复开启, 溶液管内部第二凹槽则反向倒钩住溶液管盖子,使其在一次性受压入位后形成封闭环境,不容易被再次打 开;所述溶液管管体外周设有溶液管外部凹槽,能与连接管对应接口内设的凸起密封环配合形成反向倒钩 结构,形成封闭环境而不容易被打开;所述溶液管管体底部设有底部结构,它外周边缘设底部切痕,当底 部结构受到一定作用力时,它从底部切痕处断裂脱离,此时预先分装在溶液管内的样品溶液能够从断裂缝 隙流出; 
  2)连接管:用于将溶液管和试纸管密闭连接起来,并促使释放溶液管中的核酸扩增反应溶液;所述 连接管上设有一个或多个与所述溶液管下部管体外形匹配的沉孔形接口;所述沉孔形接口内设有溶液管凸 起密封环,能与插入接口的溶液管外部凹槽配合形成反向倒钩结构,形成封闭环境而不容易被再次打开; 该连接管上还设有一个或多个与试纸管匹配的接口,该接口内设有试纸管凸起密封环,该试纸管凸起密封 环与插入接口的试纸管外部凹槽配合成反向倒钩密封结构而不容易被打开;连接管沉孔形接口底部设有溶 液释放结构,它对溶液管底部结构给予特定作用力即可将其断裂脱离,溶液从溶液管释放出来;连接管溶 液释放结构底部设有溶液通道,溶液管释放出来的液体将经过溶液通道流到试纸管中的层析试纸的样品溶 液接收区;