层析分离方法介绍

概    述 
■ 层析法――是一种使不同分子相互分离的过程,当一混合样品被导入一固定相的支持体
中,而另一流体(移动相)通过时,由于样品各组分与固定相和移动相相互作用的大小不同,使各组分通过固定相支持体的速率不同而得分离。 
层析法的特点:能分离一系列结构较为相似的成分,以达到一般分离方法难以达到的
目的。 
■ 层析常见种类及用途: 
a.柱层析――分离量较大,主要用于分离制备; 
b.薄层层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。 c.纸层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。 
■ 层析法按分离原理大体上又可以分为 
(1) 吸附层析(利用吸附能力的差别进行分离),常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等; (2) 分配层析(利用在二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离),常用的支持剂为硅胶、硅藻土、纤维粉等,反相硅胶(键合硅胶)、液滴逆流层析则是分配层析与逆流分溶的发展; 
(3) 离子交换层析(利用离子解离强度不同进行分离),常用的离子交换树脂有强酸性(磺酸型)、强碱性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱碱性(三级胺型); 
(4) 电泳(利用电流通过时,离子趋电性不同进行分离),常用的有纸电泳、琼脂电泳、凝胶电泳。 
(5) 其他有气体层析、凝胶层析、亲和层析等, 
■ 层析方法的选择: 
(1) 非极性的成分常选择氧化铝或硅胶吸附层析; (2) 极性较大则采用分配层析或弱吸附剂吸附层析; 
(3) 酸性、两性成分可用离子交换层析,有时也可用吸附层析及分配层析。 
■ 各类化合物适宜的层析方法: 
a. 一般生物碱的分离可用硅胶或氧化铝层析,对极性较高的生物碱也可用分配层析,而对季胺型水溶性生物碱也可用分配层析或离子交换层析。 
b. 甙类的层析分离往往决定于甙元的性质,如皂甙、强心甙,一般可用分配层析或硅胶吸附层析。  
c. 芳香油、甾体、萜类(结合成甙除外)包括萜类内酯,往往**氧化铝及硅胶层析,若在氧化铝柱上有次级反应,则宜用硅胶吸附层析。   
d. 黄酮体、单宁等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附层析。    
e. 有机酸、氨基酸一般可选用离子交换层析,有时也用分配层析,有些氨基酸也可用活性炭吸附层析。 
f. 多肽、多糖等大分子化合物,常用凝胶层析、亲和层析、反相硅胶(键合硅胶)。 

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