层析原理介绍

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成:一是固定相,它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分;另一是流动相,即可以流动的物质,如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒(流动相)通过固定相时,由于各组份的理化性质存在差异,与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同,在两相中的分配(含量对比)不同,而且随溶媒向前移动,各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份,随流动相移动时受到的阻滞作用小,向前移动的速度快。反之,与固定相相互作用越强的组份,向前移动速度越慢。分部收集流出液,可得到样品中所含的各单一组份,从而达到将各组份分离的目的。  
表 按层析原理分类 
   名称   分离原理 
吸附层析法 组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同 分配层析法 各组份在流动相和静止液相(固相)中的分配系数不同 离子交换层析法 固定相是离子交换剂,各组份与离子交换剂亲和力不同 
凝胶层析法 固定相是多孔凝胶,各组份的分子大小不同,因而在凝胶上受阻滞的程度不同 亲和层析法 是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力(如酶和抑制剂、抗体和抗原、激素和受体等),将某种配体连接在载体上作为固定相,而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离生物大分子**为有效的层析技术,具有很高分辨率。 
表 按操作形式不同分类 名称 操作形式 
柱层析法 固定相装于柱内,使样品沿着一个方向前移而达分离 
薄层层析法 将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上,点样后用流动相展开,使各组份分离 纸层析法 用滤纸作液体的载体,点样后用流动相展开,使各组份分离 
薄膜层析法 将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜,以类似纸层析方法进行物质的分离  
依流动相分 
根据流动相的形式分类,层析可以分为液相层析和气相层析。 1、气相层析是指流动相为气体的层析。 2、液相层析指流动相为液体的层析。 
Rf值:主要是纸上层析法的用词。源自流速(rate of flow)。溶剂从原点渗透到距离a(一般在20—30厘米时测定)的时候,如果位于原点的物质从原点向前移动到b,那么b/a的值(0.0—1.0)就是这种物质的Rf值。

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