柱层析经验交流介绍

1、选柱子:现在见到的柱子径高比一般在1:5-10。 
2、称量:100-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶书中写硅胶量是样品量的30-40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分Rf在0.2--0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶。 
3、选洗脱剂:一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统。要使所需点在Rf值在0.2-0.3左右的比较好。常用溶剂的极性顺序:石油醚<环己烷/己烷<苯乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水。 
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂。拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。乙酸乙酯/石油醚= 4:1可用TLC分开。乙酸乙酯和石油醚(60-90)。 
4、搅成匀浆:先把硅胶泡在烧杯中,用干硅胶体积一倍的溶剂泡,用超声波超半个小时,中间看到气泡时用玻璃棒搅一下。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。 
5、装柱:  A、用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量可能使产品分解。 B、将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。 
C、装柱时一定要保证无气泡,同时敲打柱体使柱体更均匀、紧凑,装毕,用洗脱液冲三次。 
6、压实:装柱完后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直**流速恒定。柱床约被压缩**9/10体积。无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。 
7、上样:干法湿法都可以。 A、在硅胶上层加少量无水硫酸钠(以免样品被洗脱剂冲散)取适量样溶液上样。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞**接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。 
B、用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降**石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm就够了),再加压,这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行。 
8、过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,0.5ml收集馏分;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收集馏分。接收瓶一定要用可密封的。柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的。 
9、用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开。  
10、检测。要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。11、送谱。收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的**后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。 
 
实例一:

工艺:28g一步产物,加入80gDMF溶解,降温**20℃,20℃-30℃分批加入8.7g(60%含量,1.2eq)钠氢,立即放气放热,颜色由无色变黄浑浊,20℃保温1h,颜色逐渐变黑。加入36.3g(1eq)2-甲磺酰基-4,6-二甲氧基嘧啶,升温**55℃保温1h,65℃保温1h,TLC检测。 
TLC 

后处理:反应液加入300ml乙酸乙酯,用200ml x2水洗,200ml饱和食盐水洗,有机相用盐酸40ml x2萃取,水相用50ml乙酸乙酯萃取洗涤,水相加入500ml水,用乙酸乙酯300ml x2萃取,有机相用100ml饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,旋干有机相得到柱前粗品40g,经减压柱分离得到单草醚甲酯和双草醚甲酯(杂质2和杂质3)。 
减压柱梯度洗脱:柱前粗品40g,70g硅胶拌样,100g硅胶上柱,PE:EA=50:1(500ml x50)完成**个点分离;PE:EA=50:1.5(500ml x2),PE:EA=50:2(500ml x2),PE:EA=50:2.5(500ml x2),PE:EA=50:3(500ml x2)PE:EA=50:3.5(500ml x2),PE:EA=50:4.5(500ml x2)PE:EA=50:5(500ml x2)PE:EA=50:7(500ml x2),PE:EA=50:10(500ml x2)完成第二个点分离; 
TLC


水浴降温,控制温度25-30℃,滴加一半时中控TLC3,滴完后保温0.5h,中控TLC4。室温过夜后中控TLC5。 后处理: 
    反应液滴加50ml饱和氯化铵溶液,放热控制温度15-20℃,分液,有机相拉干,加入100ml EA溶解,50ml水洗,50ml饱和食盐水洗,有机相无水硫酸钠干燥,旋干得到油状物22g。经减压柱分离得到1,1-二苯乙烯。 
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