柱层析的操作步骤和注意事项介绍

柱层析技术  
常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相  的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望  
能有所帮助。  
柱子可以分为:加压,常压,减压。  
压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所  
以其他条件相同的时候,常压柱是效率**高的,但是时间也**长,比如天然化合物的分  
离,一个柱子几个月也是有的。  
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚**更多,但是由于大量的空气通过  
硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解的东西可能得  
不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。以前曾经大量的过  
减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念  头了。  
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力  
的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。非凡是在轻易分解  
的样品的分离中适用。压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得  
加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。 关于柱子的尺寸,应该是粗长的**好。  
柱子长了,相应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是  
样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。试想假如柱子十厘米,而样品就有二  
厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而假如样品层只  
有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多  
的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,  
不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。  
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。假如所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质  相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子  
);假如相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也  
可以减小淋洗剂的极性等等。 
关于无水无氧柱,适用于对氧,水敏感,易分解的产品。  
可以湿柱,也可以干柱。不过在样品之前**少要用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅  
胶饱和时放出的热量有可能是产品分解,究竟要分离的是敏感的东东,小心不为过。也  
是因为分离的东西比较敏感,所以接收瓶一定要用可密封的,遵循schlenk操作。**于是  
加压、常压、减压,随需而定。因为是schlenk操作,所以点板是个问题,假如样品是显  
色的,恭喜了,不用点板,直接看柱子上的色带就行了。假如样品无色,只好预备几十  
个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不过几次之后就知道样品在哪,也就可以省些了。像我以  
前过一根无水无氧柱,需要六个schlenk,现在只一个就能把所要的全收集到。  无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸露在外,  
很轻易是样品分解,非凡是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中  
性和酸性的,选择余地比较大,但是比硅胶要贵些。  
听说有个方法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一  
照就知道产品在哪里了,没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。  --  
※ 关于湿法、干法上样。  
湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好  
,不然溶剂就成了淋洗剂了。  很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一  
般都是比较大量的样品才会出现,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较  
好的固体才会发生,这就应该先重结晶,得到大部分的产品后再柱分,假如不能重结晶  
那就不管它了,直接过就是了,样品随着淋洗剂流动会溶解的。  
有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等,会随着溶剂一起走,  
显色是一个很长的脱尾),这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1:  
1,我觉得是越少越好,但是要保证在旋干后,不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样  
品没有吸附在硅胶上)。 溶剂的选择。  
当然是**便宜,**安全,**环保的了。所以大多选用石油醚,乙酸乙酯。文献中有写用  

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