薄层层析分析多糖成分介绍

薄层层析是一种微量而快速的层析方法。**早是Izmailov和Schraiber在1938年采用氧化铝薄层分离了植物提取液。层析是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的,故称薄层层析。 
为了使所要分析的样品各组分得到分离,必须选择合适的吸附剂。硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂,硅藻土和纤维素是分配层析中**常用的支持剂,在吸附刘或支持剂中添加了适合的粘合剂再涂布,可使薄层粘牢在玻璃板(或涤纶片基)这类基底上。 
硅胶G是一种添加了粘合剂的硅胶粉,约含12%-13%的石膏(CaSO4),它可以把一些物质从溶液中吸附于自身的表面上,利用它对各种物质的吸附能力不同,再用适当的溶剂系统展层使不同的物质得以分离。例如糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的分子量和羟基数有关,经过适当的溶剂展开后,糖在薄板上的移动速度是戊糖>己糖>双糖>三糖。若用硼酸溶液市制硅胶G可改进分离效果。对己分开 的斑点显色,而将与它位置相当的另一个未显色的斑点从薄层上与硅胶G一起刮下,以适当的溶剂将糖从硅胶G上洗脱下来,就可用糖的定量测定方法各组分的含糖量。 
薄层层析一般采用上行法,在具有密闭盖子的玻璃缸中进行,溶剂倒于缸底,简单地将薄板放入即可。保证层析缸内有饱和的蒸气是实验成功的关键。保证措施是在层析缸内壁衬一层浸湿溶剂的滤纸或缩小层析缸的容积。因为层析时,溶剂会从薄层上蒸发,样品移动到一定距离的时间就会处长。若所用溶剂系统由几个成分组成,挥发性较大的成分首先蒸发,就会使混合溶剂的组分改变,而溶剂的蒸发从薄板的中央向两边递减,致使溶剂前沿呈弯曲状,结果往往是使两边的Rf值大于中央位置的Rf值。 
薄层层析与其它方法比有明显的优点:层析时间短,可以分离多种化合物,用样品量少(微克级),与纸层析相比要灵敏10-100倍,观察结果方便,显色方法甚**可以用腐蚀性显色剂。 
  操作方法 
1.  制备硅胶G薄层板 
取硅胶G粉30g加75毫升0.1mol/L硼酸溶液,调匀后铺于洁净平整的玻板上,铺层后的薄板于100oC烘箱中烘干。取出后可用,亦可贮于干燥器中备用。薄层表面要求平整,厚薄均匀。2.  糖在硅胶G薄层上的分离 
选制备好的薄板一块,在距底边1.5cm的直线上选四个点,相互距离2cm。用毛细管分别点上不同的糖样品于四个点,样量控制在5-50µɡ,斑点直径不超过2mm。待薄层上样品自然干燥后,将薄板置于盛有层析溶剂的层析缸中,自下向上展层,当展层溶剂到达离薄板项端约1cm处时取出薄板,前沿作一记号,60oC烘干2-3小时(或空气中晾干),除尽溶剂后均匀地喷上苯胺-二苯胺-磷酸显色剂,85oC烘10分钟,各种糖则分别显出不同的颜色。记下各斑点的位置、颜色,计算Rf值。
糖的硅胶G薄层层析
一. 目的  
糖类是自然界存在的数量**多的有机化合物,它既是植物躯体和细胞的结构成份,又是 生命活动能量的主要来源,并且与植物体内各类物质的代谢密切相关,分离鉴定植物组织中 可溶性糖的种类及其变化,对了解植物体内的组织代谢和农产品的品质,具有重要意义.  本实验采用硅胶G薄层层析法,分离鉴定植物组织中可溶性糖的种类,要求通过本实验, 学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法,掌握吸附薄层层析的原理,操作及其在糖类鉴定 中的作用.  二. 原理  
植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来,经除去杂质,即可获得较纯的可 溶性糖混合物.  
薄层层析是层析法的一种,层析法是利用被分离样品混合物中各组分的物理,化学差别, 使各组分以不同程度分布在两个 相 中,这两个相通常使一个被固定在一定的支持物上的, 称为固定相;另一个是移动的,称为流动相;当流动相流过固定相时,在移动过程中由于各 组分在两相中的分配情况不同,或吸附性质不同,或电荷分布不同,或离子亲和力不同等, 而以不同速度前进,从而达到分离的目的.  
薄层层析是一种快速而微量的层析方法,它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上,对 物质进行层析的方法,本实验只讨论吸附薄层层析,即所有支持物是吸附剂(如硅胶粉), 层析时,主要是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同,因此个组分的移动速度不同, 从而达到分离混合物的目的.  
糖为多羟基化合物,具有较强的极性,在硅胶G薄板上展层时,糖与硅胶分子有一定的吸附力.硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量和羟基数目,不同的糖分子由于分 子量及羟基数的不同,因而它与硅胶分子间的吸附力不同.造成各种糖分子在展层过程中移 动的距离不同,从而将各种糖分离出来,一般吸附力的大小为:三糖>双糖>己糖>戊糖.其 中各种糖移动的速率可用Rf值表示.通过与标准糖的Rf值比较.即可鉴定出植物组织提取 液中糖的种类.  
溶质斑点中心到样点的距离  Rf( 值) = 溶剂前沿到点样点的距离  三. 实验材料,仪器和试剂  1. 材料:苹果或其他植物材料  2. 仪器:  
(1) 离心机及离心管  (2) 药物天平  (3) 研钵  (4) 量筒 25ml  (5) 移液管 10ml  (6) 恒温水浴  (7) 毛细管  (8) 层析缸  (9) 吹风机  
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