层析柱的一些总结介绍

多数微生物碱性蛋白酶不耐热,碱土金属,特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用 碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一,在丝绸、制革工业中也有广泛用途   
热稳定性 将酶液分别置于不同的温度条件下(30℃,40℃,50℃,60℃,70℃)保温 10min 后,立即在 0℃冰浴中冷却,然后在 40℃下测碱性蛋白酶活力,以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。测量三个重复求平均值,将**高的酶活力定义为 100%,分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与**高酶活性的比值。  
以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以 
缓冲液的PH=pI值+1,上阴离子柱,=pI值-1,上阳离子柱,一般缓冲液ph范围在6.5~8.5之间,与PI值相差1个PH是比较理想的。 
如果不清楚PI值,可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里,然后分别试阳离子和阴离子填料(50ul左右得体积就够了),看那个PH下挂得好。 
强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定,所以他的优点是不同pH下载量恒定,可控性好,平衡过程快速、简单。 
弱离子交换介质的缺点:适用的pH范围比较小,随着pH不同载量发生变化。但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。因此强/弱离子交换介质都可以使用 
弱离子交换介质(DEAE、ANX、CM)优点在于:和强离子交换介质的选择性不同,因此我们一般先使用强离子交换,如果优化条件还是达不到理想的分离效果,可以尝试弱离子交换,用选择性不同的介质尝试一下。 
因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同,可以说是对不同蛋白的结合力有差异。S  
技术规格 离子交换剂类型 
Q Sepharose FF                    季氨基,强阴离子 DEAE Sepharose FF              二乙基氨基乙基,弱阴离子 ANX Sepharose 4FF              二乙基氨基丙基,弱阴离子 SP Sepharose FF                    磺丙基,强阳离子 CM Sepharose FF                    羟甲基,弱阳离子 离子容量 
Q Sepharose FF                0.18-0.25mmol(Cl-)/ml DEAE Sepharose FF               0.11-0.16mmol(Cl-)/ml ANX Sepharose 4 FF               0.13-0.18mmol(Cl-)/ml SP Sepharose FF                0.18-0.25mmol(H+)/ml CM Sepharose FF                 0.09-0.13mmol(H+)/ml 动态载量 
Q Sepharose FF                    120mg HSA/ml 填料 DEAE Sepharose FF                 110mg HSA/ml 填料 ANX Sepharose 4 FF              5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料 SP Sepharose FF                  70mg RNAase/ml 填料 CM Sepharose FF                  50mg RNAase/ml 填料 
压力/流速 
Q Sepharose FF     400-700cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm DEAE Sepharose FF    300-600cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm ANX Sepharose 4 FF   **少200cm/h,100kpa,XK50/60层析柱,柱床高25cm  SP Sepharose FF     400-700cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm CM Sepharose FF     300-600cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm  
平均颗粒大小                     90um(45-165um)   基质 
Sepharose FF                    高度交联琼脂糖,6% Sepharose 4 FF                  高度交联琼脂糖,4%   
PH稳定性 
Q Sepharose FF                1-14(短期),2-12(长期) DEAE Sepharose FF              1-14(短期),2-13(长期) ANX Sepharose 4 FF              2-14(短期),3-13(长期) SP Sepharose FF               3-14(短期),4-13(长期) CM Sepharose FF                2-14(短期),4-13(长期)   
化学稳定性                        
在所有常用的水溶液缓冲液中稳定:8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇、1M NaOH和1M醋酸 20%乙醇(Q , DEAE,ANX,CM ),含0.2M醋酸钠的20%乙醇(SP)  
保存                  
保存温度                        4℃-30℃ l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用 
  
Phenyl-Sepharose HP 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 6FF 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 H.P. 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析填料 粒    径: 24-44µm 工作PH值:3-13 #p#分页标题#e#
应    用:疏水层析介质,高分辨率,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 CL-4B 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析填料 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。 产品名称:丁基-琼脂糖凝胶 4FF 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:丁基-琼脂糖凝胶 H.P. 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 24-44µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,高分辨率,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:丁基-琼脂糖凝胶 4B 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:4-8 
应    用:疏水层析介质,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:辛基-琼脂糖凝胶 4FF 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:辛基-琼脂糖凝胶 H.P. 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 24-44µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,高分辨率,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称:辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B  性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 HPLC内容: 
1、反相柱子:一般适用范围比较大。分离极性比较小的物质。极性强的物质先出柱。 ODS就是C18柱子。 
RP-8和RP-18分别是C18柱子和C8柱子。 C18柱子和C8柱子是柱子的碳链的长度不一样的。 
碳链增长了,也增加了键合相的非极性作用的面积,对保留值和选择性都有影响,随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也增强了.但是对单一或简单组分确实看不出太大区别。 
2、正相柱子:一般分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质。 APS为NH2柱子 
另外diol 代表的是球形硅胶邻二羟基丙基醇基柱,正相柱,极性强的物质后出。 
硅胶柱子的特点是可分离异构体,柱子的载样量大,用于制备分离,不污染收集的流分了,缺点是分析应用不方便,如流动相的含水量应该严格控制,再现性较差,需较长的平衡时间,不适用于梯度洗脱。 碱性化合物在氨基和二醇柱上的保留强,而偶极化合物在腈基柱子上的保留强。 建议您看看色谱分析等专业书籍有帮助的。    ODS-A  
  ODS-A液相色谱柱是*际上是销售**好的一种传统色谱柱,同时也是HPLC中应用**广泛的应用。YMC ODS-A液相色谱采用高度封端的表面结构和具有适当的疏水性,广泛地应用于多种化合物的分离。在严格质量控制体系下,对50个以上的参数进行严格控制, 保证了稳定的质量。其通常作为液相色谱标准柱。  ODS-AM  
  ODS-AM液相色谱柱是一种高碳含量的C18柱,具有和ODS-A液相色谱柱相似的选择性。二者的主要区别是ODS-AM液相色谱柱采用的是**的封端技术,采用十分严格的生产技术规范,可提供优良的峰对称性和更高分离效果的重现性,从而改善较难分离组分的峰形。  ODS-AQ  
  ODS-AQ液相色谱填料具有中等强度的疏水性和氢键键合相色谱填料,由于其具有相对高的疏水性,其与ODS-A相比有不同的保留行为,其主要用于碳水化合物的分离,如寡聚多糖类、葡萄糖苷类、药物和天然化合物的分离。  ODS-AL  
  ODS-AL液相色谱柱不仅具有疏水基团的相互作用,而且还具备由硅醇基产生的第二级相互作用,这使其与传统的ODS不同的选择性。当离子间相互作用被优 化后,特别推荐用于流动相中含有缓冲液的色谱分离,可以获得高重现性的色谱图。YMC-Pack ODS-AL液相色谱柱采用的是没有封端的高碳含量单层C18相,其只能在残存的硅醇基活性有利于色谱分离时使用,由于容易发生拖尾峰,不推荐在分析胺类 或含碱性基团的化合物中使用。  ODS H80, M80, L80  
ODS液相色谱填料是一种以硅胶为载体的三种配基覆盖率不同的 ODS填料,不同配基覆盖率将影响馏出物中疏水组分的保留行为,馏出物的官能基团或三级结构将决定分离行为的结果。J'sphere ODS液相色谱填料几乎不需要考虑疏水性和氢键键合相之间的相互作用,如离子或相互作用,其多用于分离条件的测定。   
色谱柱考虑的问题shou 先是填料的问题,大多数用于HPLC分离的柱填料使用硅胶填料,基于多孔聚合物担体与键和的有机表层(如C18&C8),应用范围较广,颗粒的大小(粒 度)在HPLC中极为重要,约5um的微粒直径兼顾了分析柱的柱效,反压和寿命。更小的多孔微粒对快速分离很有用。小**1.5um的薄壳微粒对极快速地分 离蛋白质等大分子较有用。较窄地粒度分布能保证填充床地稳定、高效和压力降**小。总的来说,3或5um全多孔微球填充HPLC色谱柱,能满足大多数分离地 需要。 #p#分页标题#e#
色谱柱地性能指标主要考虑:理论塔板数,峰不对称因子(AS),两种不同溶质地选择性,色谱柱地反压,保留值地重现性,键和相浓度,色谱柱地稳定性。  
有几点看法: 
1)本人认为,C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称.ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料,而C18还包括其他基质的填料,比如高聚物小球为基质,氧化铝为基质,氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相,这些可以称为"C18",但是不是ODS. 
2)RP- 18也是C18中的一种,不同的公司对C18填料有不同的商业名称,本质应该都是一样的.Merck公司的填料喜欢叫RP-18. 比如Merck 的LiChrospher RP-18, Superspher RP-18,Purospher RP-18. 因此,我认为说"RP-18"是改进型的不妥当.Merck的改进表现在前边的名字上,比如LiCHrospher, Superspher, Purospher表现的是不同的性能. 
3) "普通ODS分析酸性、中性或弱碱性化合物时均可以获得较佳的峰不对称度。但当分析药物化合物中的强极性含氮的碱性样品时,样品峰形就极差,拖尾严重,定 量分析精度下降",这句话我认为值得商榷.普通的ODS,在分离中性化合物,极弱性的酸或硷化合物的时候可以得到较好的峰形,对于弱**中等极性的酸碱化合 物,多数情况下会出现不同程度的拖尾.对于强极性化合物,不单是药物,其他化合物一样,都会出现严重的拖尾现象  
再次修改,除掉了不太相关的BDS,应该说论述比较全面了。 C18(C-18)、RP18(RP-18)、ODS有什么区别? 
答:C18(C-18)、ODS、RP18(RP-18)的写法一般人从表面上理解没多大的区别,三者之间常常混用,但在具体的不同场合,从严格意义上讲,还是有一定的区别。 
一般认为C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称,除了硅胶基质外,还可以包括其他基质的填料,比如高聚物小球为基质,氧化铝为基质,氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相。 
而ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料。因为大部分的C18柱是硅胶基质,因此,在很多场合内二者混为一体。 
ODS其后所标的1、2、3、4、5有的是指含碳的不同,有的是不同代的替换产品,如Spherisorb的ODS-1是指未经封尾处理的,含碳量为5.75%,ODS-2是经封尾处理的,含碳量为11.5%。不同厂家的ODS柱性能差异很大。 
RP 在不同厂家中使用的含义也不太一致,在waters的色谱柱中,RP18(8)是指经过改进的新型C18(8)柱,其不同在于在经典直链配体之间内嵌极性 基团,其选择性同C18(8)有了很大的差异,特别是对含酚基官能团的化合物。Agilent的Bonus-RP柱中RP的含义同Waters。但是在 Merck公司的色谱柱中,RP-18同C18意义相同,包括硅胶基质、氧化铝基质、及一体化的Chromolith柱。 
因此,光从C18(C-18)、RP18(RP-18)、ODS很难区别不同厂家色谱柱之间结构上的差异,**好从有关厂家的资料中寻找。