层析柱的一些总结介绍

多数微生物碱性蛋白酶不耐热,碱土金属,特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用 碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一,在丝绸、制革工业中也有广泛用途   
热稳定性 将酶液分别置于不同的温度条件下(30℃,40℃,50℃,60℃,70℃)保温 10min 后,立即在 0℃冰浴中冷却,然后在 40℃下测碱性蛋白酶活力,以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。测量三个重复求平均值,将**高的酶活力定义为 100%,分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与**高酶活性的比值。  
以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以 
缓冲液的PH=pI值+1,上阴离子柱,=pI值-1,上阳离子柱,一般缓冲液ph范围在6.5~8.5之间,与PI值相差1个PH是比较理想的。 
如果不清楚PI值,可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里,然后分别试阳离子和阴离子填料(50ul左右得体积就够了),看那个PH下挂得好。 
强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定,所以他的优点是不同pH下载量恒定,可控性好,平衡过程快速、简单。 
弱离子交换介质的缺点:适用的pH范围比较小,随着pH不同载量发生变化。但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。因此强/弱离子交换介质都可以使用 
弱离子交换介质(DEAE、ANX、CM)优点在于:和强离子交换介质的选择性不同,因此我们一般先使用强离子交换,如果优化条件还是达不到理想的分离效果,可以尝试弱离子交换,用选择性不同的介质尝试一下。 
因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同,可以说是对不同蛋白的结合力有差异。S  
技术规格 离子交换剂类型 
Q Sepharose FF                    季氨基,强阴离子 DEAE Sepharose FF              二乙基氨基乙基,弱阴离子 ANX Sepharose 4FF              二乙基氨基丙基,弱阴离子 SP Sepharose FF                    磺丙基,强阳离子 CM Sepharose FF                    羟甲基,弱阳离子 离子容量 
Q Sepharose FF                0.18-0.25mmol(Cl-)/ml DEAE Sepharose FF               0.11-0.16mmol(Cl-)/ml ANX Sepharose 4 FF               0.13-0.18mmol(Cl-)/ml SP Sepharose FF                0.18-0.25mmol(H+)/ml CM Sepharose FF                 0.09-0.13mmol(H+)/ml 动态载量 
Q Sepharose FF                    120mg HSA/ml 填料 DEAE Sepharose FF                 110mg HSA/ml 填料 ANX Sepharose 4 FF              5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料 SP Sepharose FF                  70mg RNAase/ml 填料 CM Sepharose FF                  50mg RNAase/ml 填料 
压力/流速 
Q Sepharose FF     400-700cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm DEAE Sepharose FF    300-600cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm ANX Sepharose 4 FF   **少200cm/h,100kpa,XK50/60层析柱,柱床高25cm  SP Sepharose FF     400-700cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm CM Sepharose FF     300-600cm/h,100kpa,XK50/30层析柱,柱床高15cm  
平均颗粒大小                     90um(45-165um)   基质 
Sepharose FF                    高度交联琼脂糖,6% Sepharose 4 FF                  高度交联琼脂糖,4%   
PH稳定性 
Q Sepharose FF                1-14(短期),2-12(长期) DEAE Sepharose FF              1-14(短期),2-13(长期) ANX Sepharose 4 FF              2-14(短期),3-13(长期) SP Sepharose FF               3-14(短期),4-13(长期) CM Sepharose FF                2-14(短期),4-13(长期)   
化学稳定性                        
在所有常用的水溶液缓冲液中稳定:8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇、1M NaOH和1M醋酸 20%乙醇(Q , DEAE,ANX,CM ),含0.2M醋酸钠的20%乙醇(SP)  
保存                  
保存温度                        4℃-30℃ l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用 
  
Phenyl-Sepharose HP 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 6FF 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作PH值:3-13 
应    用:疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 H.P. 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析填料 粒    径: 24-44µm 工作PH值:3-13 
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