现代柱层析技术在中药提取中的作用介绍

中药化学成分及其复杂, 若要从复杂的混合物中提取对人体有效的单一中药活性成分,使用传统的方法很难达到高纯度。但灵活综合地应用各种层析技术,如正相层析,离子交换。分子筛,反相层析,逆流色谱,为中草药的提取提供了一个有效的技术平台。层析技术具有重复性好,可在线检测,纯度高,易于产业化,易于自动化,是科学研究和工艺开拓的**方法。  
关键词:Sephadex LH-20    Sepharose Q, Sepharose SP, Spurce15 RPC    
一.应用于中草药纯化的凝胶简介  
(一)Sephadex LH-20 
国内外有很多利用Sephadex LH-20 纯化天然产物的文献报道。可纯化的天然产物有甙、生物碱、黄酮、内酯、多酚,有机酸及甾类等化合物。虽然Sephadex LH-20通常被认为是凝胶过滤的胶,由于它是Sephadex G-25交联羟丙基而成。它除了具有凝胶过滤作用以外,它还同时具有吸附层析和分配层析的性质。吸附层析依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键的数量和质量;分配层析依赖于被分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。可利用的有机溶剂通常有丙酮,乙酸已酯,氯仿,三氯甲烷,和四氢呋喃等。  
(二)离子交换Sepharose FF/HP Q,SP,DEAE, CM 
Sepharose Fast Flow Q,SP,DEAE, CM离子交换介质是以琼脂糖为架的离子交换介质,具有高流速加上高载量,同时具有高化学稳定性。  
(三)反相层析Source RPC 
Source RPC是已聚苯乙烯为基架的新一代反相填料,具有极强的化学稳定性,可耐受强酸强碱,兼容pH1-12,可用1MNaOH在位清洗和消毒,使用寿命长,疏水性和C18相近,不仅分辨率高,选择性宽,载量高,颗粒均匀;而且高流速低反压,非常容易放大。而一般的反相硅胶具有不耐碱,高反压,难装柱,不易放大的特点。  
(四)硅胶 
硅胶Silica正相层析是植物化学和中药化学的主流技术,应用非常广泛,是**经典的分离纯化技术。  
二.Sephadex LH-20纯化中草药有效成分
1.利用Sephadex LH-20纯化黄酮类物质及黄酮甙  
黄酮类化合物是泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结而成的系列化合物,广泛存在于天然植物中。在植物体内大部分与糖成甙,一部分以甙元形式存在,大多数呈黄色或淡黄色。它的生理作用也多种多样。利用Sephadex LH-20纯化黄酮类物质**经典的例子是对橙皮素,山奈酚和槲皮素的分离。 
    灯盏花具有治疗脑血栓形成、脑栓塞、多发性神经炎等脑血管意外所致的瘫痪症。现在的中药均是以其总黄酮作为药效成分,利用Sephadex LH-20结合其它方法就可以将其四种不同的黄酮类物质分开。它们是灯盏乙素(scutellarin)、5,6,4‘-三羟基黄酮-7-0-β- D –半乳糖醛酸苷、灯盏甲素和黄芩素7-0-β- D –吡喃葡萄糖苷2。为进一步探索其生理机制奠定了基础。另外,梁鸿和赵玉英3等人利用Sephadex LH-20将柴胡中的八种黄酮类化合物分离。它们是柴胡色原酮酸、芦丁、槲皮异鼠李素、异鼠李素3-葡萄糖甙、葛根素、7、4’-二羟基-异黄酮-7-葡萄糖甙、色氨酸。 
    台湾科学家4在Loranthus Kaoi Kiu 叶中分离出八种黄酮类物质。它们是1、儿茶素的混合物 2、表儿茶素  3、 2‘,4’,6‘-三羟基二氢黄酮4’-0-β- D-乳糖甙,4、松烯柏素-7-o-β-D- 乳糖甙  5、山奈酚-3-0-α-D- 鼠李糖甙 6、山奈酚3,7-二-0-β- D 乳糖甙  7、槲皮素3-0-α- D- 鼠李糖甙  8 、槲皮素3-0-β- D 乳糖甙。在工艺中,有两步使用Sephadex LH-20。      
下图!为使用Sephadex LH-20纯化40%大豆异黄酮的浸提混合物,一步就可得到纯度90%以上的大豆异黄酮。下图2为使用Sephadex LH-20纯化红色黄花素

3.利用Sephadex LH-20纯化生物碱 
生物碱是来源于植物界的一大类含氮有机化合物,大多数具有较复杂的氮杂环结构,具有广泛的生理活性,是许多中草药和药用植物的有效成分。常见的即包括吡咯类、哌啶类、吲哚类、咪唑类、奎宁类、苯丙二氮卓类等。在植物中的生物碱往往是几种或几十种并存,且来源于同一个前体,因此,使用传统的方法很难取得高纯度的单体。但使用Sephadex LH-20可以获得满意的效果。 
J. Labrana 和G.Choy15从Narcissus bujei 中利用Sephadex LH-20将石蒜碱和高石蒜碱有效的进行了分离。K.Schmidt 和S.Stoyanova从菌丝体中利用Sephadex LH-20有效的分离出了嘧啶碱。另外,可利用Sephadex LH-20分离五种具有镇定、催眠效用的苯丙二氮卓类生物碱;治疗各种疼痛症的腺嘌呤17;治疗肺虚久咳的腺甙浙贝宁、茄啶18及有起死回生效用的日本附子里的乌头碱19。  
4.利用Sephadex LH-20纯化有机酸,多酚和醇 
在中药中常见的有机酸有柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、草酸等。它们在植物体内除少数以游离态存在以外,一般都与钾、钙、镁等金属离子或生物碱成盐。使用Sephadex LH-20以丙酮作为流动相可以将琥珀酸、马来酸和酒石酸进行分离。在Sephadex LH-20上也可分离克级量的2-乙酰胺基苯甲酸的两个异构体20。近年来,利用Sephadex LH-20分离多酚及含多酚的有机酸报道较多,如分离茶多酚的主要成分儿茶素,在Larix decidue Mill菌根中提取多酚化合物p-羟基苯甲酸葡萄苷、p-羟苯基葡萄糖、云杉苷、儿茶素和表-儿茶素22,Ryszard Amearowicz等以甲醇为流动相从扁豆中提取抗氧化多酚活性物质,Marian Naczk等从油菜籽中提取丹宁酸23。图3为使用Sephadex LH-20 纯化迷迭香酸的图谱。图4为分离 白藜芦醇的图谱。
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